O resultado do teste do pezinho permanece inalterado após o 5º dia de vida. Contudo, mesmo após o período ideal, o teste deve ser coletado de forma mais precoce possível, na tentativa de prevenir sequelas graves e iniciar imediatamente o tratamento, se for o caso(1-2). O período ideal de coleta da primeira amostra do teste do pezinho é entre o 3º e o 5º dia de vida do bebê. Considerando que vários fatores podem influenciar no resultado do teste, como idade inadequada para coleta, prematuridade, dieta, transfusões e nutrição parenteral total, a coleta não deve ser inferior a 48 horas de alimentação proteica (amamentação) e nem superior a 30 dias.